“肠病及肺”动物模型的建立研究思路探讨

摘要：肺与大肠相表里是中医学说表里沟通的一个代表，也是近几年研究的热点。实验动物模型在中医学说的研究中占有很重要的地位，运用西医病理动物模型能否反映中医的实质是实验成功与否的条件，本文从建立溃疡性结肠炎模型入手，以探讨溃疡性结肠炎动物模型应用于“肠病及肺”的相关研究。

关键词：肠病及肺；实验动物模型；溃疡性结肠炎

中图分类号：R285文献标识码：A

文章编号：1007-2349（2012）02-0007-03

中医学说认为，人体为一整体，机体之间的的皮肤，经络，脏腑，骨髓，存在着连接内外，表里沟通的关系，诊疗疾病中的“有诸内必形于外”即是这一思想的重要应用。《灵枢•本输》言：“肺合大肠”，也就是后世的“肺与大肠相表里”。意指肺与大肠相互关联，相互影响。从而维持人体的正常生命和功能活动有着重要的意义。肺合大肠两者之间主要通过几个方面联系：（1）功能上相应，《中西汇通医经精义》云：“肺为清金。大肠为燥金。肺藏魄。而大肠肛门。即为魄门……此大肠。所以为传导肺气之府也”。肺主宣发，通调水道，肺对体内的水液，气机有宣散，控制等作用。《素问•灵兰秘典论》云：“大肠者，传导之官，变化出焉”，说明大肠对体内的糟粕起输出作用，在糟粕中，也存在者水液，在输出的过程中，也有气机起着相应的作用，所以两脏在功能上有一个共同的作用点，水液和气机。（2）生理上相互联系，主要表现在，《黄帝内经•灵枢•经脉》云：“肺手太阴之脉，起于中焦，下络大肠”，“大肠手阳明之脉，……络肺，下膈。”肺经和大肠经除经脉的直接连接外，还通过分出的络脉和别出的经别相互连络。（3）病理上相互传变，既然两者有着密切的联系，那么在疾病中同样可以通过这种联系而互相影响，包括两个方面，治疗中也常常采用相互治疗的法则①肺病及肠，肠病治肺。如《理论骈文》云：“风寒入肺皆令人咳，肺络大肠又与大肠相表里，肺咳不已，往往大肠受之”。说明肺气的闭郁，水液输布的减弱，影响大肠的传导失司。②肠病及肺，肺病治肠。《伤寒论》第235条：“阳明病，脉浮，无汗而喘者，发汗则愈，宜麻黄汤”。《血证论•脏腑病机论》云：“大肠司燥金，喜润而恶燥，与肺相表里，故病多治肺之法治之。”

本文拟从“肠病及肺”入手，试图建立“肠病及肺”的动物实验模型，以期能较全面的模拟人体肺肠之间的联系。从而为这一论述，提供依据，并能解决一些问题。

1既往模型建立概述

中医和西医在理论和实践上有很大的差异，研究和探索过程中制备的动物模型和西方医学的研究也有不同。在中医研究的动物模型中，不但要考虑病，还要考虑证，因此，评价动物模型要以病和证相结合，即最好与中医的机理相符。本实验肠病的动物模型中，第一，关键要考虑对肺的影响［1~3］，即肠病及肺，包括各个方面，如一般情况，如体重，精神，活动情况，病理表现能提供直接的证据，如肠病同时观察结肠与肺的病理切片，同时观察炎症，免疫因子能全面了解肠病炎症对肺的影响，肺肠微生物的观察可以试图观察肠病与肺的内环境等。第二，肠病及肺的模型符合中医肺肠相关的纽带，即肺主宣发，主运化水液，大肠主传导。

既往建立的实验动物模型中概况起来主要有两大类，一类为肠道的闭阻不通，如便秘和结扎直肠等模型，许红等复制大鼠直肠半结扎模型，观察心、肝、肾、肺和肠等器官的形态学改变，观察肺泡灌洗液细胞分类计数变化以及大承气汤的干预效果，结果证明了肠道病变可引起特异性的肺脏损害;通过治疗肠道病变，肺部的损害随之减轻，从而侧面印证了中医“肺合大肠”脏腑相关理论，肺-肠病理生理存在一定的相关性及互动调节现象［4］。叶建红等通过建立便秘大鼠模型探讨肺肠的微生态，结果表明模型组结肠和肺组织的菌群类型及数量都有不同程度的变化［5］。另一类大肠的传导失司，如炎症性肠病模型和脾阳虚的泄泻模型等。如方亚利等以葡聚糖硫酸钠（DSS）建立小鼠溃疡性结肠炎模型，并检测呼吸道分泌液中sIgA含量，结论显示无统计学意义［6］。孙小云等［7］运用通腑汤观察急性肺损伤（AII）大鼠肠组织中降钙素基因相关肽（CGRP）的影响，结论显示肠组织中CGRD降低明显，有统计学意义。都从不同的方面探讨了肺与大肠的相互关系。

2模型的建立

2.1造模方案取体重（180～220）g健康SD大鼠，雄性，共70只。按体重随机分成空白对照（30只），模型组（30只）和治疗组（10只）。所有大鼠常规适应性饲养1周后，模型组及治疗组大鼠均以2.4%水合氯1.0~1.2 mL/100 g 腹腔注射麻醉后，在石蜡油润滑下，经肠道轻缓插入输液管至距肛8 cm处，将100 mg/kgTNBS（三硝基苯磺酸）加入等体积50%乙醇，注入大鼠结肠，然后注入约0.5 mL空气，将大鼠尾部向上轻提45°放置1 min，然后保持平躺自然清醒。空白对照组大鼠按上述方法给予等量生理盐水灌肠；分别在造模第2周、第5周、第8周，随机抽取正常对照组和模型组大鼠各10只，随机抽取空白对照组和模型组大鼠各10只，以2.4%水合氯醛1.0~1.2 mL/100 g腹腔注射麻醉并处死测定相应指标［8~10］。治疗组于第5周选用三拗汤于TNBS造模后行灌胃治疗，至第8周统一处死。

2.2测定内容一般情况，观察大鼠的精神，进食，活动，体重等情况，取正常组和对照组结肠和肺部组织，制作病理切片HE染色后显微镜下观察结肠和肺部组织病理变化。从免疫方面探讨肺和大肠的相关性，采用双抗体夹心ABC一ELLSA法，测定结肠和肺组织IL-1、TNF-α水平变化［6］。

3模型讨论

3.1实验动物模型选取的要点是能反应大肠与肺之间的联系［11］，前以论述肺与大肠相表里的关系纽带主要是水液和气机，孔小云等从水液代谢角度探讨肺与大肠的关系［12］。本实验拟从大肠传导失司，来探讨对肺的输布，运化的作用的影响，采用TNBS建立溃疡性结肠炎模型。其优点：（1）TNBS建立结肠炎模型以其，价格不高，重复性好，病理变化和人体相似，故应用广泛，依据较高。（2）结肠炎模型引起的症状，主要为腹泻，肠道病理损坏为特征。符合肠病的损坏导致肠道失司，气化不利这一特征。符合能否反映对肺影响的这一特点。

3.2模型大鼠处死时间的选择TNBS属于半抗原，单独在体内不能诱导免疫应答，只有在与组织蛋白等高分子物质结合后才能诱发免疫反应，造模时需用乙醇作为肠黏膜屏障的破坏剂［13~14］，使TNBS与肠黏膜角蛋白结合成全抗原，从而激发局部免疫反应。而对其机体的影响，王皓等报道称，溃疡性结肠炎动物模型病理变化在第1～3周为急性期改变，以中性粒细胞浸润为主；第4～8周为慢性炎症改变，浸润细胞主要为淋巴细胞和浆细胞［15］。考虑到肠病及肺的传变，假设在传变的过程中需要时间，故选择时间拟定在2.5.8周，这样做的优点是能较全面反应TNBS在大鼠整个周期的影响，利于观察肺肠之间的相关性，且能评估对肺部的影响程度。

3.3关于IL-1、TNF-α的选取UC的发病机制虽未完全明确，但是免疫因素在其中具有重要的意义，研究发现，UC病变黏膜局部巨噬细胞活化，释放一系列细胞因（IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α），活动性UC血清、结肠黏IL-1、TNF-α膜中TNF-α、IL-6、IL-8水平均明显升高，其结肠黏膜中TNF-αIL-6及IL-8的mRNA表达明显增加，这些细胞因子的表达和分泌均与疾病的炎症程度呈正相关。IL-6、IL-8、IL-1和TNF-α等促炎症细胞因子已是公认的能介导UC发病的细胞因子［16］。孙慧怡等［17］探讨IBD患者血清TNF-α和IL-8水平与疾病活动度的关系，结果UC和CD活动期患者TNF-α和IL-8血清水平均高于缓解期患者及正常组，IBD患者血清TNF-α和IL-8水平升高，并参与了肠黏膜组织的炎症损伤。

3.4三拗汤《太平惠民和剂局方》由麻黄，杏仁，甘草组成，主要运用于外感风寒，肺气不宣证。鼻塞声重，语音不出，咳嗽胸闷。临床中运用只宣发肺气来治疗肠病的案例很少，多通过肺肠合治来达到治疗效果，李亚玲［18］运用以桑白皮，黄芩等治疗慢性溃疡性结肠炎，虽然也有宣肺的功效，从实质来讲，也属清热解毒之品，郑舜华［19］采用补肺益肠法治疗溃疡性结肠炎，从病久及虚，病久及瘀的观点入手，用党参，黄芪，桑白皮，血竭等药物进行了大鼠实验，张永艳［20］运用宣肺健脾汤治疗慢性溃疡性结肠炎，均丰富了肺肠的相关研究。本实验旨在考虑通过治肺对肺部水液气机和宣散，在微观上观察对肠病的影响，在病理解剖上可能达不到客观标准，但TNF-α和IL-8含量与模型组相比有差异则意义重大。

此外，本实验尚有考虑不足之处，如实验模型是否会随着TNBS对模型损害的逐渐恢复而造成肺部指标随之改变，从而影响实验统计意义。免疫指标较少，不能较为完全的反应对免疫方面的影响，可酌情增加指标，或从神经肽方面如免疫组化的SP，VIP物质等进行相关性探索。

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（收稿日期：2011-11-21）

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